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G-Biosciences Spin-OUT离心式脱盐柱 使用说明

今天为大家介绍G-Biosciences Spin-OUT离心式脱盐柱的使用方法:

以G-Biosciences离心式脱盐柱Spin-OUT GT-1200 Medi为例:

G-Biosciences Spin-OUT GT-1200,与Pharmacia的Sephadex G-50的功能类似,都是用来代替比较耗时的传统透析处理,以达到快速纯化蛋白/替换蛋白质缓冲液的目的,不过前者是离心式的,后者是重力式的。GT-1200适宜于纯化分子量大于12,000的蛋白质,有两种上样量规格的:Micro和Medi。没有现成的使用说明材料,听朋友介绍这是非常不错的品牌,在国外很火。感兴趣之余啃下其英文说明书了,先了解下其使用步骤:

 

一、使用前准备:

1.上下颠倒数次,将管中的凝胶悬浮起来,然后100×g离心1min,让胶体回到管底。这里有两点需要注意的:1)新的柱子看过去几乎是透明的,不要认为什么填料都没有,其实是颗粒太细了;2)离心力是×g,在离心机上显示的是RCF这个单位,而不是RPM。这两个单位有本质区别,需要特别留意。其中:

RPM(revolution per minute)为离心机每分钟的转数(单位:周/分钟);RCF(relative centrifugal force)为相对离心力,以地心引力即重力加速度的倍数来表示,一般用×g表示。 两者转换关系如下: RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r为离心机转子半径(单位:米)。

2.拔掉两头的塞子,将柱子放在10ml离心管中,1,000×g离心2min以移除储存buffer。离心完成后,即可看见白色的填充料。

二、开始使用(交换buffer)

1. 用缓冲液平衡柱子:加入1-2ml缓冲液,将柱子放到10ml离心管中,静置数分钟让缓冲液全部进入柱体后,再重复加入3-5次。最后以1,000×g离心2min,弃掉收集到的溶液,以保证buffer被全部替换了。

2. 将柱子放到新的离心管中,缓慢加入蛋白质样品。注意,上样量为Medi的柱子最多加入0.5ml样品,上样量为Micro的柱子最多加入0.1ml样品。样品加在柱子中间的凝胶上,而不要碰到树脂部件。加样结束后静置1-2min,让凝胶充分将样品吸收。

3. 将柱子放到一个新的离心管中,1,000×g离心4min,即可获得纯化好样品了。

三、柱子的再生

1. 柱子可以重复利用。

2. 需要用到2×蛋白质洗脱buffer,用量是每1ml填料使用1ml buffer。

3. 加入洗脱buffer后静置5min。

4. 再用5倍填料体积的去离子水冲洗柱子。

5. 最后用30% 的乙醇保存在4℃条件下。

 

 

 

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