二、消化不掉：怎么办？

原因

• 钙镁离子抑制：用了含钙镁的 PBS 洗涤，Ca²⁺/Mg²⁺ 直接削弱胰酶；
• 血清残留：旧培养液未洗净，血清中抑制剂中和胰酶；
• 胰酶失活：反复冻融或保存不当导致效价下降；
• 时间过短：未到脱壁时机就终止。

解决方案

① 洗涤务必用无钙镁 PBS；② 弃液后多洗一次去除血清；③ 37℃ 孵育并轻拍瓶壁辅助脱壁；④ 仍不脱壁可适当延长，但勤看显微镜；⑤ 怀疑失效则更换新批次 Gibco 原装胰酶。

三、消化过度：细胞成团、死亡

原因

孵育时间过长、胰酶浓度偏高或吹打过猛，破坏细胞膜与连接，导致细胞成团、活率骤降。

解决方案

• 一旦镜下见细胞圆亮、间隙大，立即用含血清培养基终止；
• 下次缩短消化时间（如从 5 分钟降到 2 分钟）或换 0.05% 低浓度胰酶；
• 吹打动作轻柔，避免机械损伤；
• 成团严重可经 40 μm 细胞筛或低速短时离心缓解。

四、胰酶结块 / 污染

• 结块多因反复冻融或温度波动，建议分装成小瓶、单次取用；
• 出现浑浊、絮状物或颜色异常，怀疑污染应停用；
• 到货即异常，联系供应商退换——华雅思创对 25200072/25200056 提供到货异常售后。

五、30 秒排查清单

1. 洗涤用的是无钙镁 PBS 吗？ → 否，则换；
2. 血清残留洗净了吗？ → 否，则再加洗一次；
3. 胰酶是否原装、在效期内、未反复冻融？ → 否，则换新；
4. 消化时在镜下观察了吗？ → 养成”勤看少等”习惯；
5. 终止是否用了含血清培养基？ → 否，则立即补加。