小鼠肺组织单细胞悬液经过一系列染色处理后，在BD Celesta流式细胞仪上呈现出清晰的细胞亚群分布图，B细胞、NK细胞、DC细胞和巨噬细胞被不同荧光标记区分开来。

小鼠作为最常用的实验动物模型，在免疫学、肿瘤学和发育生物学研究中占据核心地位。对小鼠免疫系统进行精准解析，流式细胞术是至关重要的技术手段，而抗体试剂的质量与选择直接影响实验结果的准确性和可重复性。

01 BD流式抗体技术平台与优势

BD Biosciences作为全球领先的流式细胞术解决方案提供商，开发了完整的技术平台，包括独特的荧光染料系统、抗体验证流程和配套试剂。

BD Horizon Brilliant系列染料是其核心创新之一，如BV421、BV510、BV605、BV650、BV786等，这些染料具有更高的荧光强度和更好的光谱分离性，使多色流式实验（如同时分析10个指标）成为可能。

BD Pharmingen品牌抗体经过严格验证，确保批间一致性和特异性。BD还提供完整的配套试剂，如FcR阻断剂、固定破膜试剂和染色缓冲液，形成完整的实验工作流程。

针对小鼠细胞表面标志物筛选，BD推出了Lyoplate™筛选系统，这是一个预格式化的96孔板抗体集合，便于快速筛查和鉴定小鼠细胞表面抗原表达。

02 小鼠主要免疫细胞亚群的BD抗体选择

合理搭配不同荧光标记的抗体是流式实验成功的关键。下面按细胞类型分类，列出常用的BD小鼠流式抗体。

泛白细胞标记抗体是实验的起点，用于圈定免疫细胞群体：

T细胞及其亚群的深入分析需要多个标志物组合。T细胞研究中需要区分不同功能状态的细胞，如初始T细胞、效应T细胞和调节性T细胞。

B细胞、NK细胞和髓系细胞的鉴定则需要另一套标志物组合。这些细胞在固有免疫和适应性免疫中扮演不同角色，需要多参数同时检测以准确区分。

在实际研究中，科研人员通常需要根据组织类型和研究问题设计特定的抗体组合。例如，江苏省疾病预防控制中心在2024年的采购需求中，就包含了多种BD流式抗体用于免疫分析研究。

针对小鼠肺组织免疫细胞的全面分析，可以采用10色方案同时检测B细胞、NK细胞、DC细胞和巨噬细胞。

该方案使用了BD Celesta流式细胞仪（3激光12色配置），涵盖了从活死染色（Fixable Viability Stain 510）到各种细胞表面标志物的完整检测体。

对于小鼠脾脏免疫细胞的深度分析，9色方案可以同时解析初始T细胞、效应T细胞、Th17细胞和调节性T细胞。

这种方案需要结合表面标记染色和核内转录因子检测，因此需要使用BD的Transcription Factor Buffer Set等破膜固定试剂。

04 实验设计与优化要点

进行多色流式实验时，有几个关键因素需要考虑。光谱重叠与补偿调节是多色流式实验的基础，必须为每个荧光染料设置单阳管，使用BD CompBeads或实际细胞样本进行补偿调节。

Fc受体阻断对减少非特异性结合至关重要，特别是在检测髓系细胞时，可使用小鼠CD16/CD32抗体（货号553141）进行预处理。

荧光染料搭配原则应遵循亮度匹配原则，将最亮的荧光染料（如BV421）用于表达量最低的标志物，将较暗的染料用于高表达标志物。

当同时使用两种或更多BD Horizon Brilliant染料时，必须使用BD Horizon Brilliant Stain Buffer（货号563794）以最小化染料间的相互作用。

BD还提供CBA（Cytometric Bead Array）技术平台，用于同时检测多种可溶性蛋白如细胞因子、趋化因子等，适用于小鼠样本的有27种因子，包括IFN-γ、IL系列、TNF、MCP-1等。

随着流式技术的不断发展，BD推出的光谱流式细胞仪进一步提升了多色检测能力。一位研究人员在对小鼠骨髓来源巨噬细胞进行分析时，使用包含CD3、CD19和CD49b抗体的筛选面板排除了T细胞、B细胞和NK细胞的污染，确保了对目标细胞群的准确分析。

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