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在癌症治疗的前沿领域，CAR-T/TCR-T 免疫细胞治疗技术正以前所未有的速度发展，为众多癌症患者带来新的希望。从实验室研究到临床应用，这一技术背后有着复杂而精密的技术路线。今天让我们一同深入了解 CAR-T/TCR-T 免疫细胞治疗技术的奥秘。
CAR-T 和 TCR-T 免疫细胞治疗的核心在于激活和增强患者自身的免疫系统来对抗癌症。在 CAR-T 治疗中，医生首先从患者体内提取 T 细胞，这些细胞被称为 “免疫战士”。随后，通过基因工程技术，为这些 T 细胞装备上特殊导航 —— 嵌合抗原受体（CAR），使它们能够精准识别并锁定肿瘤细胞表面的特定抗原。经过大量扩增后，这些改造升级的 CAR-T 细胞被重新注入患者体内，迅速发动对肿瘤细胞的精准攻击，展现出强大的抗癌能力。
TCR-T 治疗则另辟蹊径，它聚焦于改造 T 细胞的 T 细胞受体（TCR）。TCR 是 T 细胞表面用于识别抗原的受体，TCR-T 技术通过基因编辑等手段，使 TCR 能够识别肿瘤细胞内部的特异性抗原肽 – MHC 复合物，从而激活 T 细胞的杀伤功能，对肿瘤细胞实施精准打击，尤其在应对某些隐藏在细胞内部抗原的肿瘤方面具有独特优势。
一切从获取患者的免疫细胞开始，通常是采集外周血中的单个核细胞PBMC，其中包含了 T 细胞。为了确保后续改造的顺利进行，细胞的纯度和活性至关重要，需要经过一系列精细的分离和纯化步骤。获取细胞后，激活 T细胞是关键的一步。常用的方法包括使用抗 CD3 和抗 CD28 单克隆抗体模拟 T 细胞受体和共刺激信号，或者利用特定的激活因子刺激 T 细胞表面的受体，使 T 细胞从相对静止的状态进入激活状态，打开它们的增殖和功能激活开关，细胞体积增大、开始快速分裂，同时表面分子表达发生变化，为接下来的基因改造做好充分准备。
在基因改造环节，慢病毒转导系统是常用的工具之一。慢病毒载体经过精心设计，能够将携带 CAR 或 TCR 基因的遗传物质高效地传递到 T 细胞内部。然而，传统的慢病毒转导存在效率瓶颈，转导效率的高低直接决定了成功改造的 T 细胞数量，进而影响治疗效果。
LentiBOOST®—Pharma grade 产品的出现为这一环节带来了突破。它可以显著提高慢病毒转导效率至90%，使更多 T 细胞能够成功获得 CAR 或 TCR 基因。而且，它还能增加每个细胞的可滴定载体拷贝数，减少慢病毒载体的使用量，降低了生产成本。其 “即插即用” 的特性，无培养器皿包被要求，能快速整合到现有的转导方案中，大大提高了实验操作的便捷性和效率，可提供医药级用于科研，GMP级用于临床应用，助力科研工作者和企业加速推进 CAR-T/TCR-T 产品的研发进程。
除了慢病毒转导引入外源基因，基因编辑技术如 CRISPR/Cas9 系统在 CAR-T/TCR-T 治疗中也发挥着重要作用。通过基因编辑，可以对 T 细胞自身的基因进行精准改造，例如敲除可能引发免疫排斥的特定基因，使改造后的 T 细胞在患者体内的存活时间和功能发挥更加持久和稳定；或者优化 T 细胞的信号通路相关基因，增强其对肿瘤细胞的杀伤能力。
Invitrogen A36499 TrueCut Cas9 蛋白 v2 是基因编辑过程中的一大利器。作为一种重组的酿脓性链球菌 Cas9（野生型）蛋白，它与向导 RNA（gRNA）能形成非常稳定的核糖核蛋白（RNP）复合物，这种稳定性对于基因编辑的精准性和效率至关重要。核定位信号（NLS）的引入更是如虎添翼，帮助 Cas9 蛋白顺利入核，增加了基因组 DNA 切割的几率，从而提高了基因编辑的成功率。同时，它可以直接通过脂质体介导转染试剂或电穿孔进行转染，省去了耗时的克隆步骤，大大缩短了基因编辑的时间周期，为快速高效的免疫细胞改造提供了有力支持。
成功改造后的 T 细胞数量相对有限，需要进行大规模的扩增才能满足回输到患者体内治疗的需求。细胞扩增过程需要提供适宜的培养环境，包括营养物质、细胞因子以及适当的刺激信号等，以确保细胞的快速增殖和维持良好的活性。
Gibco A2596101 CTS™ 免疫细胞血清替代物（SR）在这一环节发挥着关键作用。它设计用于添加到基础细胞培养基中，具有成分明确且无异种成分的优势，不含牛或其他非人动物源性组分，从而尽可能降低了与人血清相关的供应和安全风险。它能够支持多克隆 T 细胞的扩增，无论是通过 CD3/CD28 微珠活化、OKT3 mAb 活化，还是病毒特异性和肿瘤特异性 T 细胞的扩增都能胜任。并且，它对 T 细胞表型（CD4、CD8 和 CD62L）的支持作用可媲美人血清，同时支持基因修饰 CAR T 细胞（慢病毒转导）的扩增，减少了与验证人血清相关的成本和时间，具有足够的通用性，可配合多种基础培养基使用，为细胞扩增提供了稳定可靠的营养支持，确保了扩增后细胞的质量和功能。
在细胞回输到患者体内之前，严格的质量控制与检测是必不可少的。这包括对细胞的数量、活性、表型、基因编辑成功率以及是否存在污染等多个方面的评估检测。
对于病毒载体相关的检测，Cell Biolabs VPK-120 逆转录病毒快速定量试剂盒提供了快速准确的解决方案。它能在 45 – 60 分钟内快速完成病毒滴度的定量检测，采用荧光法检测病毒核酸浓度，无论是纯化前还是纯化后的样品都能进行检测，灵敏度高达 1.5×109个病毒颗粒/mL，100μL逆转录病毒上清。通过精准检测病毒滴度，可以确保病毒载体在生产过程中的质量符合要求，为后续的细胞改造和治疗提供可靠保障，有助于及时发现和排除潜在的生产问题，保证整个 CAR-T/TCR-T 制备工艺的质量稳定性。
在患者体内，这些经过改造的 CAR-T/TCR-T 细胞开始执行它们的使命。它们会迅速识别并结合肿瘤细胞表面或内部的特定抗原，激活免疫反应，释放细胞毒性物质，精准杀伤肿瘤细胞。同时，它们还能在体内持续存活一段时间，对肿瘤细胞保持监视，防止肿瘤复发。
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