细胞传代是细胞培养的基础操作，解离试剂直接决定细胞活力与后续实验结果。很多科研人员在做干细胞、流式样本时，会寻找比胰酶更温和的消化试剂，A6964-100ML Merck-sigma Accutase® 溶液就是广受科研人员认可的细胞脱壁试剂，华雅思创现货供应，为实验室试剂采购提供稳定货源。

 一、细胞解离试剂选型要点

1. 细胞保护能力：敏感细胞、干细胞、原代细胞不能使用强消化试剂，需选择低损伤配方，保护细胞表面蛋白。
2. 组分纯净度：动物源成分会引入未知杂质，高标准实验优先选择无动物源试剂。
3. 无菌质控：细胞培养试剂必须无菌，低内毒素，避免微生物污染影响细胞生长。
4. 使用便捷性：优先选择即用型成品试剂，省去配制、过滤灭菌的人工成本。
5. 适用性：试剂需要适配多种细胞类型，同时兼容普通培养板与包被型培养载体。

 二、A6964 Accutase® 溶液 适配高标准细胞实验需求

A6964-100ML Merck-Sigma Accutase® 溶液是成熟的商品化细胞解离液，核心特点：

– 复合酶体系，温和分解细胞与培养皿之间的粘附结构，短时间完成细胞脱附，减少长时间酶解带来的细胞凋亡。

– 无动物源组分，减少外源蛋白干扰，适合细胞表面标志物分析、单细胞测序前样本制备。

– 无菌过滤、低内毒素，批次稳定性好，不同批次之间酶活波动小，实验重复性佳。

– 溶剂为无钙镁 DPBS，体系稳定，解冻后直接使用，无需额外调配。

– 适用细胞种类丰富，覆盖各类肿瘤细胞系、干细胞、原代分离细胞。

 三、对比传统胰酶，有哪些差异化优势

常规胰酶消化力度强，容易破坏细胞膜表面抗原，对于干细胞、原代细胞容易造成大量细胞死亡；部分实验还需要血清或胰酶抑制剂终止反应，增加操作步骤。

Accutase® A6964 配方更柔和，细胞损伤更低，保留表面标记，很多场景不用终止反应，在流式、单细胞样本制备中优势明显，是很多高分文献里常用的解离试剂。

A6964-100ML Merck-Sigma Accutase® 溶液说明

General description

凭借有效的作用和对不同类型细胞的耐受性以及血清诱导的中和作用，胰蛋白酶可用于组织解离。

Application

来自猪胰腺的胰蛋白酶已被用于消化鸡骨头。它还被用于分离黄体内皮细胞。。

对于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例约为1:100至1:20。本品的典型用途是使贴壁细胞从培养表面脱落。 使细胞解离所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物代数。 Trypsins也被用于细胞培养过程中的细胞再悬浮，在蛋白质组学研究中用于蛋白质的消化，以及在各种凝胶消化中。 其他的应用包括通过基于膜的技术评估结晶，以及在一项研究中确定蛋白质折叠速率和产量可以被动力学陷阱的存在所限制。

Biochem/physiol Actions

胰蛋白酶可切割赖氨酸和精氨酸残基的C末端肽段。 如果酸性残基位于切割位点的任意一侧，则该反应的水解速度减慢，并且如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧，则水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH条件为7-9。 胰蛋白酶还可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺键。 将EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作为螯合剂，用于中和钙离子和镁离子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除这些离子会增加酶活性。

丝氨酸蛋白酶抑制剂（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）会抑制胰蛋白酶。

Preparation Note

本品为冻干粉，可以25mg/mL溶于Hank′s平衡盐溶液。

对于需要EDTA的应用，溶解胰蛋白酶应该使用不含Ca2+ 或 Mg2+的缓冲盐溶液.

Other Notes

一个BAEE单位以BAEE作为底物，在25°C、pH 7.6条件下每分钟每毫升产生0.001的ΔA253 。一个BTEE单位=320个ATEE单位。反应体积=3.2mL（1cm的光径）。

胰蛋白酶是由含223个氨基酸残基的单链多肽组成的，它通过切割胰蛋白酶原的Lys-1le肽键以去除N-末端六肽而获得。 氨基酸序列通过6个二硫键交联。 这是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶，在Lys-Ser残基处断裂，产生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族的成员。

Disclaimer

溶于1mM HCl的溶液分装后可在-20℃稳定保存1年。Ca2+ 的存在也会降低胰蛋白酶的自水解性，保持其在溶液中的稳定性。 胰蛋白酶也将在2.0 M尿素、2.0 M盐酸胍或0.1% (w/v) SDS中保持大部分活性。

 四、华雅思创现货保障，冷链配送

华雅思创专注进口生物试剂、细胞培养耗材供应，Merck-Sigma A6964-100ML Accutase® 溶液库存充足，支持冷链干冰发货，可提供产品相关资质文件。科研机构、生物企业可批量采购，避免试剂断货耽误细胞传代与样本制备工作。

细胞解离试剂选型，细胞活性、组分纯度、批次稳定性是核心考量。A6964-100ML Merck-Sigma Accutase® 溶液适合对细胞保护要求高的实验，华雅思创现货供应，是细胞实验室采购的可靠选择。