Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Maxi)
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■ 产品概述 |
本制品是基于Capturem新型膜技术的一次性使用离心柱,可在30 min内实现血浆等多种生物体液样品中细胞外囊泡(EVs)的简单快速提取。其基本原理是根据EVs的生化性质,选择与其特异性结合的凝集素(非抗体)固定于Capturem™膜上,进而对EVs进行提取,产物纯度高、污染少。 |
■ 产品特点 |
· 适用范围广— 可应用于全血、血浆、血清、唾液、尿液、脑脊液、母乳、细胞培养上清液等多种生物体液样品中的EVs提取 · 快速、重复性好– 30 min内即可从最高850 μl(Mini)或24 ml(Maxi)生物体液样品中快速提取EVs,不同操作者也可获得具有重复性的EVs收量 · 收量高— EVs最高收量可达1010(Mini)或1011(Maxi),可获得足够的exosomal RNA应用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究 · 纯度高— 提取的EVs经Western Blot检测表达exosome蛋白质,而不表达nonexosomal污染蛋白质,如calnexin和 albumin · 完整性好– 基于凝集素的提取原理,EVs不易被破坏,TEM下观察呈经典形态 · 简单易用— 试剂盒组分配备齐全,包含一次性的预清洁柱,一次性的离心柱,以及平衡、洗涤和洗脱缓冲液,且经过优化,操作简便 |
■ 操作流程 |
注:1. *过滤步骤使用100-kDa MWCO的过滤装置,过滤时间取决于样品的类型和体积。 2. 本制品最大载样量约为1010 EVs/column(Mini)或1011 EVs/column(Maxi),多次上样收量也不会超过最大值。 |
■ 实验例 |
实验例 1 |
与超速离心法相比,本制品分离得到的EVs浓度和纯度更高。分别使用本制品和超速离心法从500 μl血浆样品中分离EVs,进行三次重复性实验,使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 检测。每种方法的粒径分布计算以平均值(黑线)和标准误差(红线)显示。结果显示,本制品提取的EVs平均粒径大小为81 nm(D90=110 nm),超速离心法提取的EVs平均粒径大小为135 nm(D90=203 nm)。上图可见,使用本制品提取的EVs具有更窄的粒径分布范围,且稳定性更好。 |
实验例 2 |
使用本制品成功地从不同生物体液样品中提取EVs。上图NTA结果显示,本制品可以应用于多种生物体液样品的EVs提取,如母乳、唾液、脑脊液、血清、尿液、条件培养基。每种方法的粒径分布计算以平均值(黑线)和标准误差(红线)显示。 |
实验例 3 |
对使用本制品与超速离心法提取的EVs中的目的蛋白质进行Western blot分析。结果显示,与超速离心法相比,本制品提取的EVs包含更多的exosome特异性标记物CD63、CD9和Alix,而non-exosome蛋白质(calnexin和albumin)含量较少。因此,本制品提取的EVs纯度更高、污染蛋白质更少。 |
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