用层析法，电泳法，免疫化学的方法对蛋白样本进行分离或分析前通常需要先进行蛋白定量。用比色法进行蛋白定量分析的试剂通常分为两类：一类是间接检测法，即检测与蛋白螯合后被还原铜离子；另一类是直接检测法，即使用与蛋白结合的染料，检测样品中颜色的变化。所有的检测方法都要适用于应用的适用性。每种检测方法都有它的局限和优势，出于复杂的研发需要，以G-Biosciences公司为代表的生物科技公司开发出了多种蛋白定量试剂盒。这些试剂都是熟悉的、稳定的方法，并且能够提供一致可靠的结果，包括增强的染料结合蛋白定量，基于铜离子的蛋白定量，创新的测试条和点蛋白定量。总体而言，这些方法代表了目前的比色法检测和总蛋白定量的技术水平。

四大金刚之-BCA蛋白定量

BCA蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法, 也叫史密斯分析定量，和去污剂溶解的蛋白溶液都是兼容的。

BCA蛋白定量法基于2个反应。首先，蛋白样品中的肽键还原二价铜离子为一价铜离子，这是一个温度依赖的反应。被还原铜离子的量和溶液中的蛋白的量成正比。下一步，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，在0.02-2mg/ml浓度范围内有较好的线性关系，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

BCA蛋白定量分析适合在 1ml比色皿或微孔板的蛋白溶液定量。试剂盒可以提供传统的BSA蛋白标准物或非动物蛋白标准物。对于稀释的低浓度的蛋白样品（0.5-20µg/ml），笔者推荐使用微量BCA蛋白定量分析试剂盒。对于含有还原剂的样品，推荐你使用BCA-还原剂兼容型蛋白定量分析试剂盒。

BCA的优势是：

灵敏度高的显色检测

蛋白浓度检测范围20-2,000µg/ml

与多数离子和非离子型去污剂兼容

方便的微孔板和1ml比色皿检测形式

四大金刚之-CB-X蛋白定量

对于科研人员来说，从市场上大量的蛋白定量产品中选择可以和自己的样本兼容的试剂盒是一个难题。CB-X蛋白定量分析试剂盒解决了这个难题，因为它和常规使用的缓冲液以及蛋白分离，储存盒检测的条件都是兼容的。

对于简单不复杂的水质缓冲液蛋白样本，CB-X是一个高度灵敏的，单个试剂的检测，5分钟可以完成实验。CB-X蛋白定量分析试剂盒使用一个改进版的考马斯亮蓝染料。

对于复杂的蛋白样本，CB-X蛋白定量分析试剂盒带有能够去除干扰准确蛋白定量的试剂和化学品从而来回收样本的必需试剂。这些干扰试剂包括去污剂，离液剂，还原剂，烷化剂，糖，高盐浓度，缓冲液试剂，螯合剂。去杂回收步骤和随后的蛋白定量分析实在同一个管中完成保证没有蛋白的丢失和蛋白定量的准确性。

如果这个蛋白样本不包含干扰试剂可以直接进行单个试剂定量分析同时可以得到一个线性反应。如果干扰试剂存在或者产生人为的结果这时蛋白样本可用去杂回收试剂进行一步处理，然后进行蛋白定量来产生线性的反应。

CB-X蛋白定量分析试剂盒同时提供一个批次特定性的CB-X查询表格，这可以让科研人员进行单个蛋白的回收，然后定量，之后在CB-X查询表格上通过吸收值来得到蛋白的浓度。CB-X查询表格消除了所需要的蛋白标准，节省的大量的时间和精力。CB-X查询表格是通过复杂的蛋白混合物制成，和来自于哺乳动物，植物，细菌和酵母的蛋白数据可以很好的吻合。一套牛血清白蛋白标准物一起提供，当科研人员单独使用CB-X染料，或者他们倾向于得到自己的标准曲线或得到在自己特定的试验下的CB-X查询表格时，这套标准物用于产生标准曲线。CB-X蛋白定量分析试剂盒在每个检测0.5-50微克的时候是非常可靠的。试剂盒包含足够的CB-X检测染料来进行500次蛋白定量以及足够的回收试剂用于250次回收。

CB-X检测的优势：

0.5-50微克的线性反应

迅速沉淀和颜色反应

效期长，可以有12个月稳定保存

高度的可靠性和重复性

四大金刚之-RED 660蛋白定量

去污剂和还原剂兼容的蛋白定量

RED 660蛋白定量检测是基于一种试剂的显色反应，它的效果要优于其他商业化的显色反应定量检测，包括Bradford和增强的Coomassie/ Bradford定量检测。RED 660蛋白定量检测为您带来更好的线性，更好的颜色稳定性，以及和考马斯法相比对于去污剂，还原剂和其他干扰试剂更好的兼容性。这种单个的即用的试剂可以为您迅速分析总蛋白浓度和产生高度可重复性的结果。

这种检测适用于简单和快速的蛋白定量，可以检测蛋白浓度在50-2000μg/ml的浓度范围内。

这种检测是基于单个染料金属复合物试剂。蛋白和染料金属复合物的结合是在酸性的条件下从而产生颜色的变化，从红棕色变为绿色，颜色密度的变化和蛋白浓度呈正比，颜色的变化是染料金属复合物在低PH值下去质子化的结果，这个过程通过和正电荷的氨基酸基团反应下完成的。蛋白定量可以使用少至0.5微克的蛋白，蛋白染料复合物可以在5分钟内达到反应终点，同时可以在几天内保持稳定。

RED 660蛋白定量试剂盒提供500个标准检测或者2500个标准微孔检测。RED 660蛋白定量试剂盒和大部分去污剂兼容，它的兼容性可以被Neutralizer™进一步增强。Neutralizer™是一种独特的化学物质，它能够隔绝离子去污剂，包括SDS，使溶液和RED 660蛋白定量试剂兼容。Neutralizer™也可以和Laemmli上样缓冲液一起使用。

对于蛋白定量的干扰

兼容于RED 660蛋白定量的试剂以及这些试剂在标准检测种所接受的浓度被列了出来。在大部分情况下使用一个校准的空白对照可以消除或减少由干扰试剂所导致的错误。

*表明这种试剂和RED 660蛋白定量一起使用所接受的浓度是配套Neutralizer™一起使用。

RED 660蛋白定量优势：

l 迅速，单个试剂检测

l 兼容性好，和一系列去污剂和还原剂兼容

l 线性好，和其他蛋白定量方法相比有更好的线性标准曲线

四大金刚之-Non-Interfering™（NI）无干扰蛋白定量

保证蛋白定量不受干扰试剂的影响。

一种高度灵敏的，显色法的蛋白定量方法，这种检测克服了常规实验室试剂存在于蛋白溶液中对蛋白定量的干扰，同时显示出最小的蛋白和蛋白之间的检测波动性。

这种定量方法不受常规实验试剂存在的影响，比如还原剂，螯合试剂，去污剂，氨试剂，糖，离液剂，盐类，药物，抗体，钴和其他常规实验室试剂。NI蛋白定量法由两步组成。

通用蛋白沉淀试剂(UPPA™)加到蛋白溶液中来迅速沉淀总蛋白。蛋白通过离心得到固定以及干扰试剂在上清液中从而被丢弃。

蛋白浓度得到定量通过和碱性铜离子溶液进行混合，铜离子结合到肽的主链上，定量检测未结合的铜离子。检测和蛋白的侧链无关从而使蛋白之间的波动性可以最小化。颜色深度和蛋白的量成反比。

Non-Interfering™（NI）无干扰蛋白定量优势：

l 线性反应0.5μg-50μg蛋白

l 少量样本即可，只需1-50μl

l 不受非蛋白化学品和试剂的影响

l 实验时间，大约30分钟

l 产品效期长，可以存放一年

常用的蛋白定量产品的选择：

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华雅思创生物—G-Biosciences全国授权代理

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