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【科普分享】RNA荧光原位杂交技术简介

RNA表达水平高度动态,并集成了遗传和表观遗传学的调控机制,可以作为极佳的分标记物指示细胞的功能状态。近年来,转录组分析在癌症研究中的广泛应用业已证明,RNA与蛋白质一样可以作为临床诊断、治疗评估及预后预测的生物学指标。为了充分利用RNA作为生物学标记物的这些潜力, 迫切需要开发出有效的方法来常规检测RNA 。
目前用RNA表达水平检测的实验技术较为常用的是:

1.RNA荧光原位杂交(RNA-FISH)技术用于在细胞中定位和定量特定的RNA分子。这项技术不仅有助于揭示基因表达的时空模式,还为研究者提供了关于细胞活动和疾病机制的独特见解。RNA-FISH技术的历史可以追溯到20世纪80年代,当时科学家们开始尝试在细胞中直接检测RNA。然而,由于RNA的天然低丰度及易降解特性,这一技术的开发面临巨大挑战。直到20世纪90年代,随着探针设计的改进和新荧光染料的出现,RNA-FISH才开始在科研中得到广泛应用。RNA-FISH技术的原理基于探针与靶序列的特异性结合。首先,研究人员会设计出与目标RNA序列互补的荧光探针。这些探针在杂交缓冲液中与细胞中的目标RNA结合,形成探针-靶RNA复合物。然后,通过洗涤步骤去除未结合的探针,最后用荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。荧光原位杂交技术具有高度的特异性和敏感性,可以在细胞和组织水平上提供准确的分子信息。它已成为生命科学研究和临床诊断中不可或缺的工具之一。荧光原位杂交市场在过去几年中呈现稳定增长,预计将继续保持增长趋势,该市场的价值预计将在未来几年内达到数亿美元。目前ACD公司旗下的RNAscope®正是可满足这一需求的新型的RNA原位杂交技术,它可在组织和细胞中检测目标RNA,绘制真实而重要的信号通路和关联网络。该技术基于其独特的探针设计与背景抑制技术,并且融合了传统RNA原位杂交技术与FISH技术的优点,在单细胞水平,实现了单个RNA的可视化,代表了RNA原位杂交领域的一项重大进步,是目前最精准的RNA检测技术。目前,RNA荧光原位杂交技术在生命科学领域的应用场景非常广泛。例如,在基因功能研究方面,研究人员可以利用这项技术检测特定基因在细胞内的表达模式。在肿瘤诊疗领域,RNA-FISH可以用于检测与癌症相关的基因异常表达,从而为疾病的诊断和治疗提供参考。此外,RNA-FISH技术还可以用于研究病毒感染、神经科学和药理学等多个领域。

2.空间转录组学技术自斩获了Nature Methods 2020 年“年度技术”以来,引起更加广泛的关注。目前空间转录组学全球规模约4亿美元,50%用户在北美,未来十年年成长率在25%以上。中国的用户规模有望达到全球的20-30%,年成长率在40%以上。然而,空间转录组的研究还需要扩展检测数量和分析工具,同样地,空间背景下的分辨率、规模和信息种类也需要提高。

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