由美国Portal公司开发的创新型递送平台Gateway™系统，基于先进的机械挤压穿孔技术，不仅在造血干细胞的工程化改造中表现出色，还能高效递送多种RNA类载荷（包括mRNA、siRNA、saRNA等）。该系统在原代免疫细胞及干细胞的多重递送中展现出低毒性、高存活率与广谱细胞兼容性的优势，大幅简化了细胞工程改造流程。

Gateway：研发级仪器，适用于非临床应用场景。 Gateway需与 Booster 耗材配套使用，该耗材内含经优化的芯片 —— 该技术针对递送效率与细胞存活率可同步优化，且可广泛兼容不同细胞浓度与缓冲液。

重量                                               8lbs/3.62 Kg
尺寸(高x宽x深)                            10.25″x11.25″x6.5′ (260mmx285mmx165mm)
容积范围                                        50-200u
细胞数量范围                               0.5-10M/m
设备类型                                       研发级别
兼容设备                                       独立仪器

Gateway™：模块化设计实现精准高效递送

Gateway™系统由两部分组成：主机控制单元采用紧凑型台式设计，可精确控制输送参数，且能轻松置于生物安全柜内操作；MicroBooster™则是针对不同细胞类型优化设计的递送芯片，具备特定孔径结构，确保各类细胞均能实现更高效率的外源载荷处理。

图1. Portal机械挤压穿孔技术工作原理

混合：将细胞与目标载荷（如 mRNA、RNP等）共同悬浮于溶液中；

挤压：使细胞快速通过 Portal特殊设计的微流控芯片通道（孔径约为细胞直径的70%）；

进入：细胞在物理挤压下发生瞬时形变，形成可自我修复的孔隙，周围目标分子顺势进入细胞质；

恢复：细胞膜迅速修复，细胞恢复完整状态。

整个过程快速、温和，无需化学试剂或病毒载体，也避免了电击对细胞造成的应激与损伤。

实验数据验证：高效递送与功能实现

1. 高效递送mRNA至多种免疫细胞

使用Gateway™系统向人类外周血单个核细胞 (PBMCs)递送GFP mRNA 20小时后，流式细胞术检测显示细胞活性良好，且在T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞中均检测到广泛GFP表达。

2. 人类诱导多能干细胞（iPSCs）中mRNA的高效表达

递送GFP mRNA至人iPSCs 20小时后，通过荧光显微镜与流式细胞术均观察到强GFP信号，细胞状态保持稳定。

3. CD34+细胞中的基因敲低

递送B2M siRNA至人类CD34+造血干细胞40小时后，流式细胞术显示B2M表达显著下降，同时细胞存活率维持较高水平。

4. 初始T细胞中的高效多重递送

从外周血单个核细胞中分离出初始T细胞，将GFP mRNA、荧光标记的葡聚糖聚合物和β2微球蛋白（B2M）CRISPR RNPs等多重载体递送至初始T细胞。40小时后，使用流式细胞术评估mRNA和B2M蛋白的表达，证实该系统支持高效多重递送。

5. CAR-T功能验证

将CD19嵌合抗原受体（CAR）mRNA递送至活化的T细胞中。转染20小时后，采用流式细胞术检测CD19 CAR的表达水平。随后，将高表达CAR的T细胞与Raji细胞共培养，通过Cytotox96法检测LDH释放量，以评估CAR-T细胞的效应功能。

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