NK细胞活化扩增培养

自然杀伤细胞（NK）是重要的免疫细胞，能识别并清除肿瘤和病毒感染。体外大量培养NK细胞，满足免疫治疗所需一向比较困难。据资料，现有的培养方法都是采用扩增培养基搭配细胞因子（IL-2，IL-7，IL-15）的方案，需要研究者自行优化后使用。

Corning的NK培养套装包含抗体预包被T75细胞培养瓶，50mL NK细胞活化培养基，1.8mL NK细胞活化添加剂和1 L NK细胞扩增培养基。前三个组份特别设计用于NK细胞活化，而NK细胞扩增培养基用于NK细胞扩增。NK活化培养基和扩增培养基生产都是使用高质量试剂和cGMP级的原料。培养基唯二所含蛋白是注射级的血清白蛋白和重组人胰岛素。

Corning® NK Expansion Kit组成

NK细胞活化培养基

NK细胞活化添加剂

NK细胞扩增培养基

抗体预包被T75细胞培养瓶

细胞培养袋

Corning® NK Expansion Kit特色

扩增能力强，在14天内可达到100倍扩增

效应细胞比例高，可达80％

 操作方便

Corning® NK细胞活化扩增培养套装性能

—接种容器 预包被T-75培养瓶

—组份

Pre-coated T-75 flask 抗体预包被T75细胞培养瓶

50 mL NK细胞活化培养基

1.8 mL NK细胞活化添加剂

1L  NK细胞扩增培养基

—操作友好度 方法明确，操作简单

—抗凝剂兼容性 肝素，柠檬酸钠

—细胞产量（14天，30mL 血样） 约 3 万亿

—扩增倍数 约100倍

—CD3-CD56+表型，14天 83%

—NK效应细胞数量 约2.5万亿

—细胞杀伤力（ET=5:1，靶细胞K562） 77.9%

—培养体积 1.5L

—培养周期 14天

NK 细胞扩增和活化方法

1.  抗凝血室温离心，400 xg，10min，上层血浆转移到新管。

2.  热灭活自体血浆，56°C，30min。离心， 800 xg ， 20 min，去除沉淀。4°C 保存上清血浆，培养备用。

3.  加入等体积PBS（不含钙镁）替代被移除血浆保持体积不变，小心重悬血细胞。

注意：PBS预加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血细胞活性。

4.  使用淋巴细胞分离液从上面的血样中制备PBMCs（人外周血单个核细胞）。

注意：使用新鲜采集的人血（2h内采集）有利培养，不要使用超过24h的血样。

5.  至少5倍体积的PBS（不含钙镁）清洗PBMCs。室温离心500xg，10min，收集PBMCs。

6.   PBMCs稀释到 1 x 10⁶ cells/mL，使用NK活化培养基配比1.8mL NK活化添加剂和10%自体血浆。

7.  预包被T-75培养瓶使用前，用PBS（不含钙镁）清洗两次。

8.  添加30 mL PBMC悬液到预包被T-75培养瓶，37°C，5% CO2培养。

注意：第六天之前，如果培养基变黄，细胞密度超过2.0 x 10⁶ cells/mL，需要添加新鲜的NK活化培养基配比10%自体血浆，保持细胞密度大于 5 x 10⁵ cells/mL。

9.  培养第六天，培养液离心，适量NK扩增培养基（1000 IU/mL IL-2 和10%自体血浆）重悬细胞，再转移到T-225培养瓶或透气细胞培养袋。

10.  每隔两三天，根据细胞扩增状态，培养体系中添加新鲜的NK扩增培养基（1000 IU/mL IL-2 和10%自体血浆）保持细胞密度在5 x 10⁵到 2.0 x 10⁶ cells/mL之间。

注意：NK扩增阶段，所加新鲜培养基自体血浆含量推荐范围：0.5%-1%。

11.  培养14天左右，收获NK细胞。

注意：整个实验过程中，细胞悬液吹打和培养容器拍打都要轻柔，以避免细胞损伤，保持细胞活性。

Corning® NK Expansion Kit

Natural killer (NK) cells are crucial immune cells that can recognize and kill tumors and virus infection. It is difficult to obtain the large numbers of NK cells ex vivo that are necessary for adoptive immunotherapy. Several methods of NK activation/expansion have been reported that use expansion medium plus various cytokines (e.g., IL-2, IL-7, and IL-15). However, these require further optimization by researchers.

The Corning NK kit contains a pre-coated T-75 flask, 50 mL NK Primary medium, 1.8 mL NK Primary supplement, and 1L NK Expansion medium. The first three components are specially designed for NK cell activation, whereas the NK Expansion medium is utilized for NK cell expansion. Both NK Primary medium and NK Expansion medium are manufactured using high quality reagents and cGMP-grade raw materials. The only proteins present in the media are injectable levels of serum albumin and recombinant human insulin.

Corning® NK Expansion Kit 自然杀伤细胞活化扩增培养套装 performance

Seeding vessels Pre-coated T-75 flask

Components Pre-coated T-75 flask;

50 mL NK Primary medium

+ 1.8 mL primary supplements; 1L NK Expansion medium; permeable cell culture bag.

Operator friendliness Easy operation with clear protocol

Anticoagulant compatibility Heparin, sodium citrate

Cell yields (14 days, 30 mL blood samples) ~3 billion

Expansion fold ~100-fold

Phenotype (CD3-CD56+) NK cell (Day 14) 83%

Number of effective NK cells ~2.5 billion

Cytotoxicity (ET = 5:1, target cell: K562) 77.9%

Media volume 1.5L

Period 14 days