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CSTI NK2.0套装 / NK 细胞的活化扩增培养基套装

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  • 生产厂家: CSTI
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NK 细胞添加剂升级方案(NK2.0)

品名  说 明  产品编号  规格
Lymactin-NK  NK 细胞培养抗体  6002T01 1ml
NK-AReagent NK 细胞诱导添加剂 T20160A T20162P2 1ml
NK-B Reagent NK 细胞活化添加剂 T20160B 1ml
ALyS505NK-AC NK 细胞活化培养液  01600P02  200ml
ALyS505NK-EX NK 细胞扩增培养液 01400P10 1000ml*2
起始体系  20ml
总体系 2200ml~2500ml
总细胞数 5~6×109个(稳定)
CD3-CD56+比例  60-70%左右

 

ALyS505NK-AC 和ALyS505NK-EX 培养基进行 人类NK 细胞培养之标准操注意事项:
ALyS505NK(AC/EX)是专为细胞免疫治疗研究而开发,不含有动物蛋白质成
分,含有重组或医疗级人类蛋白质的无血清细胞培养基,对人类 NK 细胞具有高增
殖性,适用于 NK 细胞的活化与扩增,是细胞免疫治疗用最佳培养基。

【注意事项】
1、培养瓶
(1)由于部分患者 NK 细胞在诱导培养时候可能会有贴壁现象,为了避免此现象,
建议使用悬浮培养专用的 75cm2;225cm2细胞培养瓶(未经过 TC 处理或者表面
低吸附的细胞培养瓶)。
2、Lymactin-NK 抗体
(1)Lymactin-NK(2.4mg/mL生理盐水溶解)保存在-20摄氏度,使用前室温溶解尽快
使用,同时低速短时间离心保证抗体充分吸取使用。
(2) Lymactin-NK抗体培养瓶包被,轻轻摇晃培养瓶数分钟,让溶液在培养培养瓶
表面扩散。在室温下孵育 1 小时,若不能及时使用为避免抗体活性下降,
Lymactin-NK抗体保存在 4℃冰箱(一周内使用),直到使用前取出。
3、NK 细胞增殖诱导
(1)将血液采集至含有肝素钠抗凝剂的试管,为避免影响细胞活性下降,请于 2
小时内进行单个核细胞分离。室温离心力 800xg 离心 20 分钟。如果血液储存超过
2 小时,将离心时间增至 30 分钟。
(2)由于 IL-2 在 NK 细胞诱导分化及扩增作用非常重要,建议使用品质稳定的 IL-2
或进口品牌(推荐诺华品牌 Proleukin;22x106IU/vial 重组人类 IL-2)。
2 Copyright©2019CellScience&TechnologyInstituteInc.,Allrights
(3)诱导 NK 细胞培养细胞密度达到 1~1.5×106个/ml 和 5%-10%的灭活血浆才有
利于 NK 细胞的启动。
(4)ALyS505NK-AC/EX 使用前,必须将培养基进行室温平衡或者水浴箱温育培
养基,避免低温对 NK 细胞生长的影响。
(5) 严格执行流程确保加入抗体、细胞因子、培养基的计量准确无误,避免各种
成分误差对 NK细胞生长的影响。
(6) 整个过程以静置培养为主,操作过多过猛会影响 NK细胞表型。
4、扩大培养
开始活化培养 7 天后,培养培养瓶里的细胞悬浮液移入培养袋里,注意一下:
( 1 ) 细胞转移时,电动移液器轻轻吹打培养瓶壁,避免 NK细胞损伤。
( 2 ) 有贴壁细胞黏贴瓶壁尽量用手掌轻轻拍打培养瓶,不易用力过猛,避免 NK
细胞损伤。
( 3 ) 使用细胞袋建议培养液体积不超过 1000ml,才有利于 NK细胞的生长。
( 4 ) 注意观察细胞培养液颜色的变化和细胞计数,避免细胞培养过程细胞死亡。
( 5 ) 扩增 NK细胞 IL-2在培养基的含量是指每次新加入的培养基内的量,不是培
养体系总量含有浓度。

 

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