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DojindoL LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒- NH2 (for 1mg)

Peroxidase Labeling Kit-NH2 (for 1mg)

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  • 注册品牌:
  • 生产厂家: 日本Dojindo公司
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  • 规格型号: 1 mg
  • 产品编号: HY-000715
  • 产品种类: 蓝盖瓶-试剂瓶

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产品英文名称:Peroxidase Labeling Kit-NH2 (for 1mg)
产品中文名称:辣根过氧化物酶标记试剂盒- NH2 (for 1mg)

Peroxidase Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 产品特性

整个标记过程仅需3个小时
整个标记过程在1支过滤管中进行
酶标抗体回收率高

Peroxidase Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 产品描述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS),它能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂,包括储存用缓冲液。标记过程相当简单:只需将IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2 nm,为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此,当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时,NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程,也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候,使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断,因此自身不会发生反应。

Peroxidase Labeling Kit-NH2 (for 1mg )试剂盒内容
- NH2-Reactive Peroxidase ...... 1 mg x 1 tube
- Reaction Buffer ..................... 1.2 ml x 1 tube
- Filtration Tube ........................ 1 tube - 15 ml
- Washing Buffer ........................... 10 ml x 1 bottle
- Storage Buffer ............................. 10 ml x 1 bottle
-Tube (for counterbalance)... 1 tube

标记IgG操作步骤

(1)将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a)
(2)8,000-10,000 g离心10分钟。b)
(3)将10 μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c)
(4)将100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive biotin溶液加入到过滤管中,吹打使其混合。d)
(5)将过滤管放入培养箱中,37℃培养10分钟。
(6)将100 μl WS buffer加入到过滤管中,8,000-10,000 g离心10分钟,b)除去滤液。
(7)将200 μl WS buffer加入到过滤管中,8,000-10,000 g离心10分钟,b)重复该步骤一次。
(8)将200 μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e)将该溶液转移到0.5 ml试管中,在0-5℃下保存。
   a)样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于1 mg/ml,重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400 μl,则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
  b)如果溶液在离心后仍然残留在膜上,可以再离心5分钟或者适当增加转速。
  c)NH2-reactive biotin在管子的底部,向管底加入10 μl DMSO,吹打数次使其溶解。
  d)如果IgG的量为200 μg,在步骤4时加入所有的NH2-reactive biotin溶液。
  e)并不一定要使用WS buffer来回收标记产物,可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

Peroxidase Labeling Kit-NH2 (for 1mg) 注意事项

所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。
所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。
标记过程中,标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。
如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质,如BSA或凝胶,在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化(不包含于此试剂盒中)。如果IgG溶液中含有小的不溶物,离心后提取上清液来标记。
如果长时间不使用,建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存,不需要充氮气,可以更好地保持酶的活性,但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中,仍请放在0-5℃冰箱中保存。

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