ThruPLEX Tag-seq 6S(12)Kit
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Rubicon Genomics R400584 ThruPLEX Tag-seq 6S(12)Kit 12Rxns
Rubicon Genomics R400585 ThruPLEX Tag-seq 48S Kit 48Rxns
Rubicon Genomics R400586 ThruPLEX Tag-seq 96D Kit 96Rxns
构建带有UMT(Unique Molecular Tags)的Illumina NGS文库
ThruPLEX® Tag-seq Kit
提供可信的变异检测分析。
结构变异。
污染发生。
研究结果。
ThruPLEX Tag-seq可以1 ng至50 ng cfDNA或片段化的dsDNA起始,兼容多种样品类型。
■ 产品说明:
ThruPLEX Tag-seq采用带有特别分子标签(UMT)的ThruPLEX引物构建带有分子标记和样品检索引物的Illumina NGS文库。每个试剂盒包含超过1,600万个特别序列用于在扩增前标记每条DNA片段,可以在文库制备、目标富集和数据分析过程中追踪DNA片段,以检测低丰度等位基因或计数独立片段。采用ThruPLEX 技术设计及优化,可以1到50 ng DNA起始构建高多样性、高重复性文库。整个流程在单管或单孔中就可完成,只需3步,2小时,无需中间纯化步骤和样品转移,避免了操作误差和样品损失。ThruPLEX Tag-seq Kit 包含所需全部试剂,包括可以多重标记96个样品的检索引物。纯化和定量后,文库可以采用标准Illumina测序试剂和流程在Illumina NGS平台进行测序。
图1. 单管,三步操作流程。 ThruPLEX Tag-seq Kit以1-50 ng DNA起始构建检索引物文库只需3步:末端修复,接头连接和高保真文库扩增。无需纯化和样品转移步骤。简化的工作流程,在单管或单孔中2个小时即可完成,避免样品损失,增强了阳性识别。
图2. ThruPLEX DNA-seq Kit技术概要。ThruPLEX技术以片段化双链DNA或游离DNA起始,只需3步反应,简单高效。
图3. 减少背景,结果更可靠。以30 ng 1% Horizon cfDNA standard,采用 ThruPLEX Tag-seq构建文库。Agilent SureSelect富集目标区域,~5,000X覆盖度测序,采用Curio Genomics生物信息学平台分析数据。采用原始数据分析,EGFR 的突变(黄色点)会被背景误差遮盖(左图)。而在数据分析过程中使用UMT修正误差,突变更容易识别(右图)。
图4. 显著提高信噪比,发现更多。以30 ng(A)或10 ng Horizon cfDNA standard采用ThruPLEX Tag-seq构建文库,240 KB定制panel(NimbleGen SeqCapEZ)富集目标区域,HiSeq 2500 ~5,000X覆盖度测序。Curio Genomics生物信息学分析平台进行数据分析。
*数据来源于Takara Bio Inc.
■ 产品组成
自备试剂:
热循环仪(推荐使用实时仪器)
离心分离机
PCR管或96孔PCR板和密封件
低吸附滤芯枪头
新鲜制备的80%(v / v)乙醇
Agencourt®XP核酸纯化磁珠(Beckman Coulter,目录号A63880)
■ 保存
-20℃
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